تعيين كمية المواد الفينولية في الخلايا الفطرية.. نواتج أيض ثانوية لبعض أنواع من الفطريات توجد في صورة حرة أو مرتبطة

تعتبر المواد الفينولية نواتج أيض ثانوية لبعض أنواع من الفطريات وهذه المواد قد توجد في صورة حرة أو مرتبطة.

طريقة العمل:
1- تحضر فلاسكة محتوية على بيئة تشابك دوكس سائلة ومعقمة لكل مجموعة.

2- تلقح الفلاسكة بواسطة قرص من مزرعة فطرية نقية حديثة العمر.

3- تحضن الفلاسكة في درجة حرارة 25م° لمدة أسبوعين.

4- يرشح النمو الفطري بالكامل من خلال قمع.

5- يؤخذ (1 مل) من الراشح في أنبوبة ويكمل الحجم إلى 7مل بالماء المقطر مع الرج.

6- يتم إضافة (1/2 مل) من كاشف فولين Folin reagent ثم ترج الأنبوبة وتترك لمدة ثلاثة دقائق.

7- يضاف (1 مل) من محلول كربونات الصوديوم تركيز 35٪ ثم ترج الأنبوبة وتترك لمدة ساعة.

8- يحضر الكنترول (Blank) بنفس الطريقة ماعدا استبدال الراشح بالماء المقطر.

9- يتم قياس الكثافة الضوئية (O.D) عند (630 نانوميتر) ثم يتم تعيين المحتوى الفينولي للخلايا الفطرية من خلال المنحنى القياسي.