من المهم التأكد من الشخص عند أخذ عينة الدم أن يكون امضى فترة صيام لا تقل عن 8 -12 ساعة قبل سحب العينة مباشرة
أولا: النسبة الطبيعية للسكر فى الدم:-(Normal Values)
- الشخص الصائم تتراوح النسبة بين (70 - 110 mg/dl)
- الشخص الطبيعى ترتفع النسبة الى الحد الأقصى بعد تناول الطعام بساعة بحيث لا تتخطى (140 mg/dl) ثم تعود الى المعدل الطبيعى بعد ساعتان من تناول الطعام.
ثانيا: العينات: Samples
يمكن أن يكون للعينة عدة صور (سيرم / Serum أو بلازما Plasma أو سائل النخاع CSF).
تحضير العينة:
ملحوظة هامة:
يراعى فصل السيرم أو البلازما بعد سحب العينة مباشرتا لأن تركها دون فصل يؤثر على تركيز السكر فى العينة.
لفصل السيرم: (Serum) نسحب عينة دم وريدى ثم توضع فى أنبوبة سنترفيوج وتترك لتتجلط ثم تدار فى جهاز السنترفيج.
لفصل البلازما: (Plasma) نسحب عينة دم وريدى ثم توضع فى أنبوبة سنترفيوج على مانع تجلط مثل (E.D.T.A) وتخلط جيدا ثم تدار فى جهاز السنترفيج 0 (يكفى فصل العينة بطريقة واحدة من الطريقتين السابقتين).
ثالثا الأدوات المستخدمة:
بعد فصل السيرم نقوم باحضار 3 أنابيب فى حامل خاص للأنابيب ونقوم بتميز الأنابيب بالرموز الآتية B -S -T.
- B الأنبوبة الخاصة بمحلول البلانك (Blank).
- S لأنبوبة الخاصة المحلول القياسى (Standard).
- Tلأنبوبة الخاصة بعينة الشخص (Test).
- ماصات حجم 10 ميكرون وماصة 1مليلتر(1000ميكرون) لفصل المحاليل(Reagents) المستخدمة فى الاختبار.
- جهاز قياس الألوان (Colorometar) / حضانة (incubate)
الطريقة الإنزيمية (Enzimatic method)
Glecose+02+H20 God H20+Gluconate
H202+Phenol+4-Ap God Quinonimine+4H20
رابعا: المحاليل المستخدمة: (Reagents)
R 1 Buffer Solution
R2 Enzymes
R3 Standard 100mg/dl
R2 Enzymes
R3 Standard 100mg/dl
يتم خلط عبوة من R1+R2 لعمل محلول التفاعل وهو يعتبر محلول التلوين (Working Reagant) وعند اتمام الخلط تكون صلاحية هذا المحلول محدودة تتراوح من 7 أيام فى حرارة الغرفة الى شهر فى الثلاجة (عند من 3: 8 درجة) مثلا لذلك يتم التحضير حسب الاحتياج.
خامسا: عمل الأختبار:
T
|
S
|
B
|
|
10μl
|
-
|
-
|
السيرم
|
-
|
10μl
|
-
|
المحلول القياسى
|
1ml
|
1ml
|
1ml
|
محلول التفاعل
|
Mix,
incubate10min at37c or 30 minat room temperature.
|
|||
بعد إعداد الأنابيب يتم تنفيذ الجدول المقابل فى الشكل بوضع 10 ميكرون من السيرم فى أنبوبة T و10ميكرون من المحلول القياسى فى الأنبوبة S ويمكن وضع 10 ميكرن ماء مقطر فى أنبوبة البلانك B (من الممكن تجاهل وضع الماء فى الأنبوبة الأخيرة لصغر حجم الكمية).
ولإتمام الإختبار يضاف 1ml من محلول التفاعلWorking Reagant فى الثلاثة أنابيب B .S .T لإتمام التفاعل وظهور اللون:
- يترك الإختبار لمدة 10 دقائق فى الحضانة عند 37 درجة أو لمدة 30 دقيقة فى درجة حرارة الغرفة.
- ثم يضبط جهار قياس الألوان عند طول الموجة المحدد لقراءة السكر(505nm) (Wavelength).
- يتم ضبط صفر الجهازعلى محلول البلانك (Blank).
- توضع محتويات أنبوبة S فى كيوفيت(Cuvet) الخاص بالقراءة ثم توضع فى الجهاز لأخذ القراءة وتسجل.
- توضع محتويات أنبوبة T فى كيوفيت(Cuvet) الخاص بالقراءة ثم توضع فى الجهاز لأخذ القراءة وتسجل.
طريقة الحساب: (Calculation) لحساب تركيز السكر فى الدم يلزم الآتى (قراءة المحلول القياسي وقراءة العينة وتركيز المحلول القياسى).
تركيز السكر في العينة:
تركيزالمحلول القياسي = 100 (R3 Standard 100mg/dl ) ليعطى نتيجة بـ mg/ml.
ملحوظة:
المحلول القياسى هو محلول معلوم التركيز محضر مسبقا من قبل الشركة المنتجة للكيت(Kit) بإزابة وزن معلوم من المادة المراد قياسها فى حجم معلوم من الماء المقطر، لذلك هو يعطى قراءة ثابتة فى كل مرة قياس.
مثال:
إذا كانت قراءة انبوبة العينة لشخص على الجهاز =28. وكانت قراءة انبوبة المحلول القياسى على الجهاز =32.
أحسب تركيز السكر فى العينة لهذا الشخص مع العلم أن تركيز المحلول القياسى =100 وبين إذا كانت النسبة طبيعية أو غير ذالك لو أن العينة أخذت لشخص صائم.