بروتوكول تحضير فيلم الدم عالي الجودة: الأدوات، مراحل الفرد والتثبيت والصبغ، ومجموعة الاحتياطات لضمان نتائج فحص دقيقة

عملية تحضير أفلام الدم المجهرية:

تُعدّ عملية تحضير أفلام الدم (Blood Smears) على الشرائح الزجاجية حجر الزاوية في التشخيص المخبري، إذ تمكن اختصاصيي المختبرات من إجراء الفحص المجهري (Microscopic Examination) لخلايا الدم، وهو أمر حيوي لتحديد العديد من الحالات المرضية وتصنيفها. يهدف هذا الإجراء إلى فرد طبقة رقيقة وموحدة من الدم على الشريحة، مما يسمح بتقييم دقيق لشكل وحجم وعدد خلايا الدم الحمراء والبيضاء والصفائح الدموية.

أولاً: الأدوات والمواد الأساسية

لإتمام العملية بدقة وكفاءة، يجب توفير قائمة محددة من الأدوات والمواد:

الشرائح الزجاجية (Glass Slides): يجب أن تكون نظيفة، خالية من الخدوش، وجاهزة للاستخدام.
شريط الفرد (Spreader Slide/Edge): شريحة ذات حافة مستقيمة ومصقولة تُستخدم لفرد قطرة الدم.
عينة الدم: قطرة صغيرة من دم كامل (قد تُؤخذ من وخز الإصبع أو من وريد باستخدام مانع تجلط مناسب مثل EDTA).
محاليل التنظيف والتثبيت:

محلول مطهر/كحول: لتنظيف الشرائح الزجاجية قبل الاستخدام.
محلول التثبيت (Fixative Solution): غالبًا ما يكون الميثانول (Methanol)، ويستخدم لحفظ الخلايا في شكلها الطبيعي ومنع تلفها أو زوالها أثناء مراحل الصبغ.

الصبغة (Stain): أشهرها صبغات رومانوفسكي مثل صبغة ليشمان (Leishman Stain) أو صبغة رايت (Wright's Stain)، التي تُبرز المكونات الخلوية المختلفة وتسهل تمييزها.
المجهر (Microscope): جهاز الفحص النهائي لرؤية الخلايا.
معدات السلامة: قفازات واقية، مسحات قطنية.

ثانياً: الخطوات التفصيلية لتحضير فيلم الدم

تتطلب كل خطوة دقة وعناية لضمان جودة الفيلم المنتج:

1. تحضير وتنظيف الشرائح:

التنظيف الأولي: يجب مسح الشرائح الزجاجية بمحلول مطهر أو كحول لضمان خلوها من أي دهون أو غبار أو أوساخ قد تعيق التصاق الخلايا أو تؤدي إلى تلوث العينة وتداخل نتائج الفحص.

2. وضع عينة الدم:

وضع القطرة: تُؤخذ قطرة دم صغيرة جدًا (حوالي 2-3 ميكرولتر) وتوضع على الشريحة النظيفة، على مسافة حوالي 1 إلى 2 سنتيمتر من إحدى الحواف. الحجم المناسب للقطرة أمر بالغ الأهمية؛ فالقطرة الكبيرة جدًا تجعل الفيلم سميكًا وغير قابل للفحص، في حين أن القطرة الصغيرة جدًا لا تنتج فيلمًا بطول كافٍ.

3. فرد فيلم الدم (تقنية شريط الفرد):

استخدام شريط الفرد: تُستخدم شريحة زجاجية ثانية (شريط الفرد) وتُوضع بزاوية تتراوح بين 30 إلى 45 درجة خلف قطرة الدم.
الانتشار الأولي: يُسحب شريط الفرد للخلف حتى يلامس قطرة الدم وتنتشر على طول حافته بالكامل بفعل الخاصية الشعرية (Capillary Action).
عملية الفرد: يُدفع شريط الفرد إلى الأمام بحركة سريعة وثابتة وناعمة في اتجاه الطرف الآخر من الشريحة. يجب أن تكون الحركة موحدة دون توقف أو اهتزاز. الهدف هو فرد الدم في طبقة رقيقة وموحدة تنتهي بحافة مميزة على شكل "ذيل الثعلب" (Feathered Edge). هذا الذيل هو المنطقة المثالية لفحص الخلايا لكونها منفردة وغير متراكمة.

4. التجفيف والتثبيت:

التجفيف في الهواء: تُترك الشريحة لتجف تمامًا في الهواء الطلق على سطح أفقي. يجب أن يتم التجفيف بسرعة لتجنب تشوه الخلايا. عدم التجفيف الكافي هو خطأ شائع يؤدي إلى تلف الخلايا في الخطوات اللاحقة.
التثبيت (Fixation): بمجرد أن تجف الشريحة، تُغمر في محلول التثبيت (الميثانول النقي) لفترة وجيزة. يعمل التثبيت على قتل الخلايا وتجميد تركيبتها الداخلية والخارجية، مما يحافظ عليها خلال عملية الصبغ ويمنعها من الذوبان أو التفكك.

5. الصبغ والفحص المجهري:

الصبغ (Staining): تُغطى الشريحة بالصبغة (مثل صبغة رايت) لعدة دقائق. تعمل الصبغة على تفاعل كيميائي مع المكونات الخلوية (النواة، السيتوبلازم، الحبيبات) وتلوينها بألوان مختلفة (أزرق، وردي، بنفسجي)، مما يسهل تمييز أنواع الخلايا المختلفة تحت المجهر.
الغسل والتجفيف النهائي: تُغسل الصبغة بعناية باستخدام الماء المقطر أو محلول مخفف من الصبغة، ثم تُترك الشريحة لتجف مرة أخرى.
الفحص المجهري: تُوضع الشريحة تحت المجهر، وتبدأ عملية الفحص التي تشمل تقييمًا دقيقًا لتفاضل خلايا الدم البيضاء (Differential Count)، والبحث عن أي تشوهات أو خلايا غير طبيعية.

ثالثاً: الاحتياطات والأخطاء الشائعة

الاحتياطات (Safety Measures):

نظرًا للتعامل مع عينات بيولوجية، يجب الالتزام الصارم بقواعد السلامة:

التعامل الآمن مع الدم: يجب دائمًا ارتداء القفازات الواقية والنظارات عند التعامل مع عينات الدم لتجنب العدوى.
تجنب الملامسة: يجب عدم ملامسة الدم للجلد أو العينين، وفي حالة حدوث ذلك، يجب غسل المنطقة بالماء والمطهر على الفور.
التخلص السليم: التخلص من جميع الأدوات والمواد الملوثة (الشرائح، القطن، القفازات) في حاويات النفايات الطبية الحيوية المخصصة.

الأخطاء الشائعة (Common Errors):

تُعتبر الدقة في كل مرحلة من مراحل تحضير فيلم الدم أمرًا بالغ الأهمية، إذ يمكن لأي خطأ بسيط أن يؤثر سلبًا على جودة الفيلم ويُعيق عملية التشخيص الصحيحة.

الأخطاء المُرتبطة بالتحضير الأولي والفرد:

عدم تنظيف الشرائح الزجاجية جيدًا: يؤدي هذا الإهمال إلى تلوث الخلايا وظهور عيوب غير خلوية مثل بقايا الغبار أو الدهون على الفيلم. ونتيجة لذلك، تظهر مساحات فارغة أو بقايا على سطح الفيلم، مما يُعيق بشكل كبير الرؤية الواضحة لتفاصيل الخلايا ويجعل التقييم التشخيصي غير موثوق.
وضع قطرة دم كبيرة جدًا: ينتج عن هذا الخطأ فيلم دم سميك جدًا. يكون التأثير المباشر هو تراكم الخلايا فوق بعضها البعض، وخصوصًا في المنطقة التي يُفترض أن تكون مثالية للفحص (ذيل الفيلم)، مما يحجب التفاصيل الداخلية والخارجية للخلايا ويمنع تقييمها الفردي.
عدم فرد الدم بالتساوي (نتيجة لحركة متقطعة أو مهتزة): ينجم عن هذه الحركة غير الثابتة ظهور خطوط أو تجريدات في الفيلم. علاوة على ذلك، يحدث توزيع غير متساوٍ للخلايا عبر الشريحة. هذا الخلل يقلل من جودة الفيلم الكلية ويجعل أي تقييم كمي أو نوعي غير دقيق.
استخدام زاوية فرد غير صحيحة: زاوية شريط الفرد بالنسبة للشريحة تؤثر بشكل مباشر على كثافة وطول الفيلم. إذا كانت الزاوية كبيرة جدًا، ينتج عنها فيلم قصير وسميك. أما إذا كانت الزاوية صغيرة جدًا، فينتج عنها فيلم طويل ورقيق جدًا وقد لا يكون كاملًا أو موحدًا، مما يؤثر على مناطق الفحص الضرورية.

الأخطاء المُرتبطة بالتجفيف والتثبيت:

عدم ترك الشريحة لتجف تمامًا قبل التثبيت: يُعد هذا خطأً فادحًا يؤدي إلى تشوه خلايا الدم وتلفها. التثبيت (باستخدام الميثانول) على الخلايا الرطبة يتسبب في انكماشها أو انفجارها (تحلل الدم)، مما يغير شكلها الأصلي ويجعل تحديد الأمراض التشكلية (morphological diseases) مستحيلاً.

رابعاً: التطبيقات السريرية لأفلام الدم

تُعد أفلام الدم أداة تشخيصية لا غنى عنها، إذ تُستخدم في فحص وتشخيص مجموعة واسعة من اعتلالات الدم (Hematological Disorders) وغيرها من الحالات الطبية:

تشخيص فقر الدم (Anemia): تحديد نوع فقر الدم من خلال تقييم شكل وحجم وتلون خلايا الدم الحمراء (مثل فقر الدم المنجلي، فقر الدم الناتج عن نقص الحديد).
تشخيص الأورام الخبيثة: الكشف عن الخلايا السرطانية غير الناضجة في الدم، مثل حالات اللوكيميا (ابيضاض الدم).
الأمراض الطفيلية والعدوى: الكشف المباشر عن الطفيليات داخل الخلايا الحمراء، مثل طفيليات الملاريا (Malaria)، أو تقييم التغيرات في خلايا الدم البيضاء التي تشير إلى وجود عدوى بكتيرية أو فيروسية.
أمراض المناعة الذاتية: تقييم التغيرات المورفولوجية في الخلايا المرتبطة ببعض اضطرابات المناعة.
تقييم الصفائح الدموية: تحديد عدد الصفائح الدموية وتقييم حجمها وشكلها (مثل تشخيص حالات نقص أو زيادة الصفائح).